Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) на інфекції, що передаються статевим шляхом (ІПСШ) в Одесі

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) на інфекції, що передаються статевим шляхом (ІПСШ), є одним із найбільш точних і швидких методів діагностики інфекційних захворювань. Цей метод знайшов своє застосування в багатьох сферах біологічної та медичної практики (урології, гінекології, неонатології, службах переливання крові).

ПЛР була відкрита в 1986 році американським біохіміком Кері Муллісом. За це відкриття науковець був відзначений Нобелівською премією з хімії в 1993 році.

Понад 30 видів бактерій, вірусів та найпростіших можуть передаватися в результаті сексуального контакту (вагінальний, оральний та анальний секс) і об'єднуються в одну групу під назвою "інфекції, що передаються статевим шляхом (ІПСШ)". Найпоширенішими з цих захворювань нині є:

• сифіліс;
• гонорея;
• хламідіоз;
• трихомоніаз;
• вірус простого герпесу;
• вірус папіломи людини (ВПЛ);
• вірус імунодефіциту людини (ВІЛ);
• вірус гепатиту B.

Деякі інфекції можуть мати й інші шляхи передачі, наприклад, через кров, а також від матері до дитини.

Симптоми інфекцій, що передаються статевим шляхом (ІПСШ)

Найчастіше пацієнтів можуть турбувати вагінальні виділення або виділення з уретри (сечовипускального каналу), відчуття печії під час сечовипускання, виразки в ділянці статевих органів та болі в животі.

Часто ІПСШ можуть протікати безсимптомно, що ускладнює своєчасну діагностику та лікування захворювань, призводить до появи ускладнень, а також сприяє подальшому поширенню хвороб.

Як наслідок безсимптомного перебігу інфекції або неперебування до спеціалістів можуть бути такі серйозні наслідки:

• передача захворювання від матері до дитини, що, своєю чергою, може призвести до мертвонародження, передчасних пологів, низької ваги при народженні, сепсису, пневмонії, кон'юнктивіту та вроджених аномалій розвитку;
• безпліддя;
• близько 14 штамів ВПЛ є онкогенними і в 70% випадків раку шийки матки його причиною є ВПЛ типів 16 і 18.

Варто пам'ятати, що багато ІПСШ (сифіліс, хламідіоз, трихомоніаз, гонорея) цілком виліковні. Перебіг інших захворювань, спричинених вірусними агентами, може бути значно полегшено за допомогою терапії, що дозволяє зберегти високу якість життя.

Суть методу полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)

Метод базується на багаторазовому збільшенні числа копій специфічної ділянки ДНК (спрямована ампліфікація ДНК) або РНК. Завдяки багаторазовому копіюванню рівень специфічної нуклеотидної послідовності в пробі зростає в 106-108 разів, що забезпечує високий рівень чутливості методу. Для ампліфікації потрібен фермент ДНК-полімераза, отриманий з термофільних бактерій і здатний витримувати високі температури, праймери (молекули, які служать стартовими точками для подвоєння нуклеїнових кислот), нуклеотиди (структурні одиниці ДНК), буферний розчин та прилад, який забезпечує необхідну температуру для реакції.

Спочатку дволанцюгову ДНК нагрівають до 94-96°C, що призводить до розділення ланцюгів (денатурації). Потім температуру знижують, і праймери починають зв’язуватися з розділеними ланцюгами ДНК. Після цього ДНК-полімераза починає подвоєння, використовуючи праймер як основу.

Віруси можуть мати генетичний матеріал у вигляді РНК замість ДНК. У таких випадках для діагностики використовують ПЛР з зворотною транскрипцією. Цей метод відрізняється тим, що перед стандартними реакціями молекулу РНК за допомогою зворотної транскриптази перетворюють на комплементарну ДНК.

Етапи діагностики методом ПЛР

1. Збір матеріалу для дослідження (наприклад, зразок крові, слини, сечі, мазок з горла або статевих органів).
2. Транспортування та зберігання матеріалу. Матеріал можна зберігати при кімнатній температурі до 2 годин, у холодильнику при температурі 2-8°C — до 24 годин.
3. Виділення ДНК з матеріалу. З матеріалу виділяється ДНК або РНК для подальшої обробки.
4. Ампліфікація ДНК, що  здійснюється за допомогою ампліфікаційних сумішей у термостаті. Триває приблизно 2-3 години.
5. Інтерпретація результатів. Результати можуть бути проаналізовані за допомогою електрофорезу в присутності бромистого етидію: при перегляді в ультрафіолетовому світлі наявність світних ділянок свідчить про позитивний результат.

Також можна провести кількісну ПЛР. Аналізуючи дані цієї реакції, лікар може оцінити ступінь активності процесу та призначити потрібне лікування.

Переваги та недоліки методу полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)

Переваги методу ПЛР:

• Висока чутливість - тест-системи дозволяють виявити патогенні для людини бактерії та віруси навіть тоді, коли їх виявлення неможливо іншими методами (серологічними, бактеріологічними, мікроскопічними). Чутливість ампліфікаційних систем становить 10-10^3 клітин у пробі, тоді як для інших методів вона коливається в межах 10^6.
• Висока специфічність. У досліджуваному матеріалі виявляється унікальна частина ДНК, характерна лише для певного виду збудника. Таким чином, вдається уникнути проблем з перехресно-реагуючими антигенами.
• Швидкість отримання результатів. ПЛР дозволяє отримати результати в короткий проміжок часу.
• Використання різного матеріалу. Для ПЛР можна використовувати різні типи матеріалів (кров, сечу, мазок, змив, зіскрібок тощо).

Недоліки методу ПЛР:

• Ампліфікація ДНК загиблого мікроорганізму. Цю особливість методу слід враховувати при контролі лікування. Проводити ПЛР слід через 1-2 місяці після завершення терапії, протягом яких відбувається повна елімінація мікроорганізмів.
• Змінюваність та мутації мікроорганізмів. Мутації можуть впливати на специфічність ПЛР, особливо при виявленні вірусів.

З урахуванням переваг, нині діагностика за допомогою ПЛР стає все більш незамінною, точною та швидкою.

Записатися на прийом